ポルシェとシボレーが新車を投入したGTLM（GTル・マン）クラスはポルシェGTチーム勢が速さをみせ、911号車ポルシェ911 RSRと912号車ポルシェ911 RSRがフロントロウを独占した。この内、トップを奪った911号車はタンディが自らが昨年記録したGTLMレコードを0.050秒短縮する1分42秒207を記録している。
クラス3番手はコルベット・レーシングの3号車シボレー・コルベットC8.Rで、僚友4号車コルベットが4番手に入った。2019年のデイトナウイナー、BMWチームRLLの25号車BMW M8 GTEはクラス5番手から決勝に臨む。
FIA-GT3カーで争われるGTD（GTデイトナ）クラスでは、パフ・モータースポーツの9号車ポルシェ911 GT3 Rが1分45秒237でクラスポールを獲得。2番手はスクーデリア・コルサが走らせる63号車フェラーリ488 GT3 Evoが入り、マイヤー・シャンク・レーシング（MSR）の57号車アキュラNSX GT3 Evoが3番手に続いた。
日本車勢はエイム・バッサー・サリバンの12号車レクサスRC Fが1分46秒185を記録してクラス7番手に付けた一方、プラクティス2でマシントラブルが発生した僚友14号車レクサスは出走せず。道見真也も乗り込むMSRの86号車アキュラNSX GT3 Evoはトップから1.2秒遅れのクラス9番手となっている。
ロレックス24・アット・デイトナはこのあと、23日19時15分（日本時間24日9時15分）から3回目のプラクティスが行われる。
